سابقه و هدف: ژندرمانی يکی از مهمترين شيوههای تحقيقات بالينی است که ارايهدهندهی روشهای جديدی برای درمان نقصهای ژنتيکی میباشد. نقص ژنتيکی آنزيم گلوکوسربروزيداز ( Gba ) عامل بيماری گوشه بيش از بقيهی بيماریها در ژندرمانی مورد توجه قرار گرفته است. هدف از انجام اين پروژه کلونينگ و انتقال ژن آنزيم گلوکوسربروزيداز توسط لنتی ويرال وکتور ارتقايافته به ردهی سلولهای HEK میباشد. مواد و روشها: مطالعه به روش تجربی و به منظور توليد و تکثير cDNA ژن آنزيم گلوکوسربروزيداز به کمک پرايمرهای اختصاصی به روش PCR انجام گرفت و در وکتور غير بيانکننده، کلون و ترادفيابی گرديد. سپس ژن نوترکيب را در لنتی ويرال وکتور ارتقايافته دارای ژن گزارشگر GFP ساب کلون شد. پس از کشت سلولهای HEK وکتور نوترکيب لنتی ويرال به آنها منتقل شد و انتقال ژن Gba با استفاده از ژن گزارشگر GFP بررسی گرديد. نتايج: تکثير و کلونينگ ژن آنزيم گلوکوسربروزيداز با استفاده از آنزيمهای محدودگر تاييد گرديد. ترادفهای ژن Gba با ترادفهای گزارش شدهی آن کاملا تطبيق داشت. ساب کلونينگ ژن Gba در وکتور لنتی ويرال با استفاده از آنزيمهای محدودکنندهی مختلف تاييد شد. انتقال ژن نوترکيب Gba توسط بيان ژن گزارشگر با استفاده از پروتئينهای فلورسنتی تاييد گرديد. نتيجهگيری: در اين تحقيق بخشی از فرآيند پروتکل ژندرمانی با انتقال ژن آنزيم گلوکوسربروزيداز موش به سلولهای HEK توسط وکتور لنتی ويرال انجام گرفت.
کلید واژگان :ژندرمانی، انتقال ژن، گلوکوسربروزيداز،
ارزش ریالی : 500000 ریال
با پرداخت الکترونیک