فرآیند شناسائی مولکولی باکتری بعنوان یکی از عوامل ایجاد بیماری استرپتوکوکوزیس

به منظور شناسایی سویه های مختلف عوامل استرپتوکوکوزیس با استفاده از روش تعیین توالی DNA ،تعداد 515 نمونه ماهی قزل آلای آلوده به بیماری استرپتوکوکوزیس از 67 مزرعه پرورش ماهی واقع در 8 استان کشور جمع آوری گردید. ابتدا با روشهای میکروبی، بیوشیمیایی و در نهایت PCR ، 5 گونه Streptococcu uberis , S. agalactiae , dysgalatiae , S. faecium S. و S. iniae شناسایی و تایید گردید. جهت تعیین سویه های مختلف تعداد 18 نمونه (15 نمونه S. uberis ، 6 نمونه S.agalactiae و 2 نمونه S.dysgalactiae ) انتخاب و تعیین توالی گردید. واکنش PCR با استفاده از پرایمرهای C10 و B37 که براساس توالی ژن 16s rRNA طراحی شده بوده انجام گردید. محصول PCR پس از خالص سازی، تعیین توالی گردید. آنالیز آماری و رسم درخت فایلوژنی به روش UPGM با استفاده از نرم افزارهای Gen Alex و Mega 4 انجام شد. در این بررسی تنوع هاپلوتیپ ها 89/0 و تنوع نوکلئوتیدها 60/0 بود. همچنین میانگین اختلاف نوکلئوتیدها 45/0 بوده است. براساس درخت فیلوژنی رسم شده ، نمونه های گونه S. uberis در یک شاخه قرار گرفت که در این شاخه ، یک نمونه از استان فارس و یک نمونه از استان مازندران در خوشه های جداگانه قرار گرفتند. گونه های S. agalactiae در S. dysgalatiae در شاخه دوم قرار گرفت که این شاخه نیز به دوخوشه S. dysgalatiae و S. agalactiae تقسیم شده است. بیشترین فاصله ژنتیکی بین نمونه های مورد بررسی 214/0 و کمترین فاصله 002/0 بوده است. به طور کلی براساس نتایج به دست آمده می توان عنوان نمود که سه سویه مختلف از S. uberis در استانهای مورد بررسی وجود دارد. در حالیکه در بین نمونه های S. dysgalatiae و S. agalactiae سویه های مختلفی مشاهده نشده است.