بررسی مولکولی استرین غالب نوکلئوپلی¬هیدروویروس و مقایسه روابط فیلوژنتیکی آن با سایر ایزوله ها در استان مازندران و گلستان

استفاده بي رويه از حشره كش هاي شيميايي در كنترل کرم غنچه توتون H. armigera علاوه بر آلودگي محيط زيست منجر به مقاومت آفت مزبور در برابر حشره¬كش¬ها شده است. در این راستا هدف از این تحقیق ثبت ویروس NPV به عنوان عامل بیمارگر بیولوژیکی، استرین بندی، نامگذاری تمام جدایه های بومی جمع آوری شده از مناطق مختلف و نیز جهت تجاری سازی و انبوه سازی این عامل بیمارگر بوده است. Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus (HaNPV) نیز یکی از عوامل مهم کنترل بیولوژیک علیه گونه های Heliothis و تعدادی از گونه های دیگر می باشد. در این مطالعه با استفاده از نمونه های جمع آوری شده از مناطق آلوده به ویروس NPV در استان های مازندران و گلستان، تکثیر آنها روی لاروهای کرم غنچه توتون و روی رژیم غذای مصنوعی در سطح آزمایشگاه انجام شد. سپس خالص سازی ویروس، استخراج DNA، واکنش زنجیره ای پلیمراز(PCR) با استفاده از دو مارکر RAPD انجام گردید. جهت استخراج DNA ژنومی از لاروهای آلوده به ویروس NPV ، از روش CTAB (با اندکی تغییرات) استفاده گردید. در ادامه کار، از 10 جفت پرایمر RAPD جهت تکثیر DNA ویروس NPV استفاده گردید که از بین آنها دو جفت پرایمر RAPD که بیشترین پلی مورفیسم را داشتند، انتخاب شدند. سپس، این دو جفت پرایمر RAPD بر روی 16 نمونه DNA مربوط به ایزوله های مناطق جغرافیایی مختلف استان های مازندران و گلستان تست شدند و واکنش زنجیره ای پلیمراز(PCR) بر روی آنها انجام شد و بر اساس داده های مولکولی به دست آمده، تجزیه کلاستر انجام شد و دندروگرام درخت فیلوژنی با نرم افزار PyElph و به روش UPGMA رسم گردید. نتایج حاصل از دندروگرام درخت فیلوژنی، نشان داد که ایزوله های مختلف HaNPV در 5 گروه مجزا از نظر ژنتیکی قرار گرفتند و مشخص گردید که ایزوله های HaNPV که مربوط به مناطق جغرافیایی نزدیک به همدیگر هستند و در یک گروه قرار گرفتند، کمترین اختلافات ژنتیکی را با یکدیگر دارند و هر چقدر که ایزوله ها در خوشه های مجزا و دورتر از یکدیگر قرار گرفتند، نشان دهنده این می باشد که آنها اختلافات ژنتیکی بیشتری با یکدیگر دارند. این اختلاف ژنتیکی اندک در ایزوله هایی که در یک گروه قرار می گیرند، بیانگر جدا نبودن جمعیت های مورد مطالعه از یکدیگر و تبادل ژنتیکی و اجداد ژنتیکی مشترک بین آنها می باشد.