اثر تعاملی تمرینات هوازی و مصرف عصاره هیدروالکلی پوست میوه بلوط بر مقادیر پلاسمایی فیبرینوژن، اینترلوکین 1 بتا، نسفاتین-1 و اینت

در این مطالعه تجربی، جامعه آماری مورد استفاده؛ موش های سوری نر خواهند بود که از شرکت رها آوران نوین امرتات تهیه خواهند شد. تعداد 40 سر موش سوری نر (20 ماهه) به طور تصادفی اتخاب خواهند شد. آن ها، به مدت یک ماه تحت رژیم غذایی پر چرب (غذای پلیت مخصوص موش سوری با رژیم پر چرب، ساخته شده توسط شرکت رها آوران نوین امرتات) ، شامل 50 درصد کل انرژی چربی، 20 درصد پروتئین و 30 درصد کربوهیدرات (83) و در 20 قفس مجزا از جنس پلی کربنات شفاف در گروه های 2 تایی، تحت چرخه روشنایی تاریکی (12 ساعت نور و 12 ساعت تاریکی) و رطوبت 5±65 و درجه حرارت 2±25 درجه سانتی گراد قرار خواهند گرفت تا به وزن چاقی برسند و بر اساس شاخص لی (لی، 1929) چاق محسوب شوند (83). در ادامه پژوهش، رژیم غذایی پر چرب به رژیم غذایی استاندارد (ساخته شده توسط شرکت رها آوران نوین امرتات)، تغییر خواهد یافت و 6 هفته دیگر، رت ها تحت پروتکل تمرینی هوازی (6 هفته) و مصرف عصاره هیدروالکلی پوست میوه بلوط (20 میلی گرم بر کیلوگرم) قرار خواهند گرفت. در این تحقیق سعی خواهد شد؛ میزان روشنایی و میزان رطوبت کنترل شده باشد و آب (از راه بطری های ویژه 500 میلی لیتری) و غذای آزادانه در دسترس آن ها قرار گیرد. پس از رسیدن رت ها به مرحله چاقی و آشنایی با محیط آزمایشگاه، بر اساس وزن بدن همسان سازی انجام خواهد گرفت و به طور تصادفی به چهار گروه 10 تایی، گروه کنترل ، گروه مصرف عصاره هیدروالکلی پوست میوه بلوط، گروه تمرینات هوازی و گروه ترکیبی (مصرف عصاره هیدروالکلی پوست میوه بلوط با انجام تمرینات هوازی به طور همزمان) تقسیم خواهند شد. نحوه تهیه و مصرف عصاره هیدروالکلی پوست میوه بلوط: جهت تهیه عصاره هیدروالکلی پوست میوه درخت بلوط، میوه بلوط در ارتفاعات منگشت در شهرستان باغملک جمع آوری خواهد شد و سپس پوست سبز از میوه جدا خواهد گردید. پوست سبز جدا شده از میوه بلوط، در سایه بدون تابش مستقیم نور آفتاب خشک و سپس با آسیاب برقی پودر خواهند شد. 400 گرم از پودر پوست میوه بلوط را در بشر ریخته و به مدت 72 ساعت در اتانول 90 درصد در جای تاریک نگهداری می کنیم (دمای محیط 25 درجه). سپس توسط پمپ خلاء عصاره را از صافی گذرانده و به کمک دستگاه روتاری با دور 60 RPM در دمای 43 درجه سانتی گراد به مدت 4 ساعت، عصاره از حلال جدا خواهد شد. به منظور به دست آوردن عصاره خشک، یک گرم از عصاره به دست آمده را برداشته و به مدت 24 ساعت در آوان با دمای 45 درجه سانتی گراد قرار خواهیم داد. پس از تبخیر حلال، ماده خشک را با ترازو به دقت 001/0 گرم وزن کرده و به میزان 33/0 گرم عصاره خشک و خالص به دست خواهد آمد. جهت انجام آزمایش، عصاره هیدروالکلی پوست میوه بلوط ایرانی با غلظت 20 میلی گرم بر کیلوگرم را در گروه ترکیبی و گروه مصرف عصاره هیدروالکلی پوست میوه بلوط، 5 روز در هفته به میزان 20 میلی گرم بر کیلوگرم در یک میلی لیتر سرم فیزیولوژی حل خواهیم کرد و به هر موش گاواژ می شود. برای این کار کافی است مقدار مشخص نمونه را با ترازوی حساس وزن کرده و در یک میلی لیتر از حلال مربوطه حل نماییم. برای جلوگیری از استرس ناشی از گاواژ در گروه های ترکیبی و مصرف عصاره هیدروالکلی پوست میوه بلوط، همزمان با خوراندن عصاره هیدروالکلی پوست میوه بلوط در گروه های مربوطه، به همان میزان به گروه های تمرین هوازی، کنترل، سالین خورانده می شود (69، 84 و 85). برنامه تمرین هوازی: بعد از چاق شدن موش ها و تشکیل گروه ها، موش های گروه تمرین هوازی و گروه ترکیبی در ساعت های 9 تا 11 صبح به مدت 6 هفته و 5 روز در هفته، در برنامه تمرین هوازی (توسط نوارگردان مخصوص موش) شرکت داده خواهند شد. برنامه تمرینی شامل 3 مرحله خواهد بود. در مرحله اول؛ موش ها با سرعت 5 تا 10 متر در دقیقه و به مدت 10 دقیقه و با شیب صفر درجه در هفته اول روی نوارگردان راه می روند (مرحله آشنایی). پس از طی مرحله آشنایی در مرحله دوم: به مدت 3 هفته، سرعت و مدت تمرین در جلسات مختلف افزایش خواهد یافت، تا به میزان نهایی معین شده (یعنی سرعت 20 متر در دقیقه، شیب 5 درصد و مدت 40 دقیقه) برسد (مرحله اضافه بار). در مرحله سوم؛ برای مدت 2 هفته فعالیت با سرعت 20 متر در دقیقه، شیب 5 درصد و مدت 40 دقیقه ادامه می یابد (مرحله حفظ یا تثبیت) (86). این شدت تمرین برای موش های چاق، معادل تقریباً 75% بیشینه اکسیژن مصرفی در نظر گرفته خواهد شد (87). از مجموع 40 دقیقه تمرین، در ابتدای هر جلسه 5 دقیقه برای گرم کردن (سرعت 10 متر در دقیقه و شیب صفر) و در انتهای هر جلسه با کم کردن سرعت نوارگردان به طور معکوس، 5 دقیقه برای سرد کردن در نظر گرفته شد. لازم به ذکر است گروه کنترل بعد از چاقی مداخله ای دریافت نمی کنند و غذای استاندارد و آب به صورت آزادانه در اختیار آن ها قرار می گیرند. نمونه گیری: 48 ساعت پس از آخرین جلسه تمرین هوازی و مصرف عصاره هیدروالکلی پوست میوه بلوط و به دنبال 12 ساعت ناشتایی، موش ها با استشمام محلول اتر درون محفظه شیشه ای بیهوش خواهند شد. سپس با برش پوست در ناحیه شکم و قفسه سینه، از راه باز کردن حفره های شکمی، حدود 10 میلی لیتر خون به طور مستقیم از قلب موش ها توسط سرنگ آغشته به ماده ضد انعقاد خون ((EDTA)Ethylene Diamine Tetraacetic Acid) گرفته خواهد شد و به لوله آزمایشی حاوی EDTA منتقل خواهد شد. سپس نمونه های جمع آوری شده با سرعت 3000 دور در دقیقه و مدت 10 دقیقه، سانتریفیوژ شده و و پلاسمای حاصل در میکروتیوب های یک میلی لیتری ریخته و برای اجرای مراحل بعدی به آزمایشگاه منتقل و در دمای 70- درجه سانتی گراد ( به صورت فریز) نگهداری می شوند. پس از جمع آوری نمونه ها در مرحله پس آزمون، کلیه نمونه های خونی در یک روز از فریز خارج خواهند شد و پلاسمای بدست آمده برای سنجش میزان اینترلوکین 10، اینترلوکین یک بتا، نسفاتین-1 و فیبرینوژن مورد استفاده قرار می گیرد. برای اندازه گیری متغیر های وابسته تحقیق (اینترلوکین 10، اینترلوکین یک بتا، نسفاتین-1 و فیبرینوژن) از دستگاه الایزا و کیت های الایزا مخصوص رت، بر اساس دستورالعمل شرکت سازنده اندازه گیری می شوند. روش‌های آماري از آمار توصیفی برای جهت تعیین میانگین، انحراف استاندارد، دامنه تغییرات استفاده خواهد شد. برای نرمال بودن توزیع داده ها با استفاده از آزمون کلموگراف اسمیرنف، جهت مقایسه بین گروهی از آزمون آنالیز واریانس یک طرفه و آزمون تعقیبی LSD استفاده خواهد شد. کلیه محاسبات آماری با استفاده از نرم افزار SPSS نسخه 20 انجام می شود و نتایج این تجزیه و تحلیل های آماری به طور کامل در نتایج تحقیق مورد بررسی قرار می گیرند.