شناسايي و جداسازي ميكروساتليت تاسماهي ايراني

در این تحقیق میکروساتلیت های خاص تاس ماهی ایران شناسایی ، جداسازی و آغازگر های اختصاصی آن بسط (develop) داده شد، . برای این منظور با استفاده از روش جذب بیوتین، كتابخانه DNA تاس ماهی ایران براي دو موتيف ميكروساتليت دي نوكلئوتيد شامل (GA, GT) و دو موتيف تترانوكلئوتيد ( GATA, GACA ) غني سازي شد .پس از کلون در وکتور و باکتری Dh5ά E.coli حدود 1800 کلونی سفید از کتابخانه ژنومی تاس ماهی ایران جدا سازی شد. از روش فیلترهیبریداسیون( Filter Hybridization) براي شناسايي و جداسازی کلني هايي که محتوي توالی های ميکروساتليت تاس ماهي ايراني بودند استفاده شدکه در بین آنها 350 کلونی مثبت شناسایی و تعیین توالی شدند . در بين توالی ها 81 توالی که کلیه شرایط لازم برای طراحی آغازگر را داشتند شناسایی شد . پس از حذف 13 توالی متشابه ، 68 جفت آغازگر اختصاصی ميكروساتليت تاس ماهي ايران بسط داده شد . آغازگر های اختصاصي تاس ماهي ايراني با نام Ape-01 الي Ape-81 نامگذاري شدند.کلیه توالی های DNA و آغازگر های اختصاصی ميكروساتليت تاس ماهي ايران در بانک ژن (GenBank ) ثبت شد. آزمايش كاركرد و كارايي آغازگر های اختصاصی میکروساتلیت تاس ماهی با PCR 24 نمونه از DNA تاس ماهی ایران روی ژل پلی آکریل آمید 6% نشان داد که از 68 جفت آغازگر، 6 آغازگر جایگاه مونومورف یا تک شکلی (monomorphic) ، 20 آغازگر جایگاه چند شکلی تتراسومیک (tetrasomic) ، 18 آغازگر جایگاه چند شکلی اکتاسومیک (octosomic) را تکثیر (amplify) کردند و 24 آغازگر هیچ جایگاهی را تکثیر نکردند یا الگوی باندها ضعیف و مبهم بودند. آزمايش كاركرد و كارايي آغازگر های اختصاصی میکروساتلیت تاس ماهی در چهار گونه ماهیان خاویاری دریای خزرشامل ازون برون (A. stellatus)، شیپ (A.nudiventris) و فیل ماهی (Huso huso) و تاس ماهی روسی (A. gueldenstaedtii) نیز انجام شد. در حالی که برای تاس ماهی ایران و تاس ماهی روسی الگوی باندهای حاصل جایگاه های پلی سومیک چهار تایی یا بیشتررا نمایش دادند ، باندهای حاصل از آغازگر ها در ازون برون، شیپ و فیل ماهی جایگاه های چند شکلی دیسومیک) (disomic را نشان دادند. این نشانگرها در مطالعات ژنتیک جمعیت انواع مختلف ماهیان خاویاری دریای خزر مفید و قابل استفاده می باشند. این گزارش اولین تحقیق از توسعه آغازگرهای ریزماهواره در بین آبزیان ایران و ماهیان خاویاری دریای خزر است.