شناسایی تنوع ژنتیکی باکتریهای نفت خوار منطقه ارسباران با روش اریک پی سی آر و آردرا

ایران اولین کشور غنی از نفت در منطقه خاورمیانه می باشد که عملیات نفتی خود را با ظرفیت تولید بیش از 4 بشکه نفت خام و m3/day80000 از سوخت دیزل شروع کرد. در این مطالعه٬ ایزوله و بررسی خصوصیات سویه های باکتری جدا شده از خاک های آلوده به هیدروکربن در اطراف مراکز ذخیره و پخش نفت در اهر در طول سال های 2010 تا 2011 بررسی شده است. هدف اصلی این مقاله٬ شرح ایزوله باکتری هایی است که توانایی تجزیه و ژن درگیر در تجزیه دیزل را دارا می باشند. سویه های باکتری مورد استفاده در این مطالعه٬ از خاک های آلوده به هیدروکربن نفت خام در در اطراف مراکز ذخیره و پخش نفت در اهر -ایران ایزوله شدند. 5 نمونه خاک آلوده به نفت دیزل از مناطق ذخیره سازی زیرزمینی جمع آوری گردید و در ظرف های دربسته در 4 درجه سانتی گراد برای استفاده کردن٬ نگهداری شدند. سوخت تجاری دیزل به عنوان تنها منبع کربن به محیط کشت اتوکلاو شده اضافه گردید. PH محیط کشت جامد برای هر یک از HCl یا NaCl به صورت 7.3 تنظیم شده است.روش محیط کشت غنی شده برای ایزوله باکتری های تجزیه کننده دیزل مورد استفاده قرار گرفت. اساس محیط کشت معدنی(MM) شامل خاک و دیزل بوده که در 35 درجه سانتی گراد با ارتعاش مداری(120 r/min) انکوبه گردید. همه سویه ها برای تعیین توانایی تجزیه سوخت دیزل و رشد در محیط کشت غنی مایع مورد آزمایش قرار گرفتند. مجموعه ای از فلاسک ارلن مایر 500میلی لیتری برای این آزمایش مورد استفاده قرار گرفت. هر فلاسک حاوی 100میلی لیتر از g/l 8 نوترینت براث به اضافه دیزل بوده و محیط کشت با انتقال ml3 از pre-culture(حدود cells/ml 180×3) انکوبه گردید و PH اولیه به 7.3 تنظیم شد. DNA ژنومی ایزوله شده٬ با یک کیت استخراجی GenEluteDNA از سیگما استخراج گردید. ارتباط فیلوژنیک ایزوله ها٬ بوسیله مقایسه داده های توالی با توالی های اعضاء جنس باسیلوس تعیین گردید که از طریق پایگاه اطلاعاتی GenBank٬ مرکز ملی برای اطلاعات بیوتکنولوژی٬ قابل دسترس می باشد. توالی ژن هریک از ایزوله های بدست آمده در این مطالعه با توالی ژن 16srRNA در پایگاه اطلاعاتی GenBank مقایسه شد. آزمایش های بیوشیمیایی و فیزیولوژیکی انجام شده٬ گونه آزمایشی٬ Bacillus sp ٬ TMY-2 می باشد. برای تایید هویت ایزوله٬ روش PCR و تعیین توالی 16 srRNA انجام گرفت. به منظور بررسی هویت باکتری به عنوان باسیلوس نیاسینی با آنالیز فنوتیپی مشخص گردید. سویه های GALACTOSIDILYTICUS, OLERONIUS, BENZOEVORANS یک داوطلب بالقوه برای bioremediation از مکان آلوده با سوخت دیزل می باشد. این گونه ها تجزیه کننده به طور موثر به عنوان باسیلوس نیاسینی شناخته شد(بیش از 98٪تشابه). استفاده از کنسرسیوم باکتری های بومی با توانایی استفاده از دیزل به عنوان بذر به داخل محیط زیست آلوده با نفت می تواند رویکرد مساعد محیطی را ثابت کند که باعث افزایش توسعه قابل تحمل گونه های باکتریایی بیگانه و شیمیایی می شود.