نوع همکاری : مجری
کارفرما : دانشگاه علوم پزشکی گلستان
سال طرح : 1392
مشاهده سایر طرح های حمیدرضا ایرانپور
زمینه و هدف: فاکتور رشد شبه انسولین نوع ۱ انسانی، پروتئینی ۷۰ آمینواسیدی با وزن مولکولی۶.۷ کیلو دالتون است که توسط کبد به طور عمده سنتز می‌شود. این پروتئین دارویی بانام تجاری INCRELEX شناخته‌شده و کاربرد مؤثری در درمان کوتاهی قد، درمان دیابت نوع ۱ و ۲ و ترمیم زخم دارد. این مطالعه به‌منظور بررسی بیان فرم طبیعی این پروتئین درمانی در باکتری E. coli BL21(DE3) به‌منظور تولید فرم نوترکیب فاکتور رشد شبه انسولین نوع ۱ انسانی انجام شد.
روش بررسی: ژن igf-1 پس از بهینه‌سازی کدون توسط پایگاه‌های بیوانفورماتیکی سنتز شد و توسط استراتژی برش با آنزیم‌های NdeI و BamHI-HF و خالص‌سازی از روی ژل در وکتور بیانیpET-24a کلون گردید. سازه بیانی ساخته‌شده با روش شوک حرارتی با CaCl2 به باکتری E. coli BL21(DE3) ترانسفورم شد. شناسایی و تأیید کلونی‌های باکتری ترانسفورم شده با سازه ژنی با استفاده از روش Colony PCR با پرایمرهای تشخیصی وکتور بیانی pET-24a انجام گرفت. بیان ژن فاکتور رشد شبه انسولین نوع ۱ انسانی توسط IPTG القاء گردید و بیان ژن در سوش القاء شده با تکنیک‌های SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ آنالیز شد. سازه بیانی فاکتور رشد شبه انسولین نوع ۱ انسانی در میزبان E. coli با روش‌های مهندسی ژنتیک تأیید شد.
یافته‌ها: نتایج آنالیز بیان ژن در سوش E. coli ترانسفورم شده توسط تکنیک‌های SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ تأیید کرد که ورود سازه به داخل وکتور بیانی انجام‌شده و بیان فاکتور رشد شبه انسولین نوع ۱ انسانی صورت گرفته است. وزن مولکولی پروتئین بیان‌شده، ۶.۷ کیلو دالتون تخمین زده شد.
نتیجه‌گیری: سازه بیانی برای کلونینگ و بیان ژن فاکتور رشد شبه انسولین نوع ۱ انسانی در باکتری اشریشیاکلی طراحی و ساخته شد و پروتئین موردنظر با موفقیت القاء و شناسایی گردید. باکتری اشریشیاکلی می‌تواند به‌عنوان میزبان مناسب در تولید فاکتور رشد شبه انسولین نوع ۱ انسانی نوترکیب مورداستفاده قرار گیرد و این فناوری قابلیت بومی‌سازی دارد.