Evaluation of synergistic effect biosurfactant produced by Rhodotorula with antifungal drugs against Candida albicans

مقدمه: بیوسورفکتانت ها ترکیباتی طبیعی و محصولات تولیدی توسط میکروارگانیسم ها می باشند که در طی سال های اخیر موارد استفاده زیادی در صنعت، پزشکی و پروژه های زیست محیطی داشته اند. دو شاخص مهم بیوسورفکتانت ها که مورد توجه بسیاری از پژوهشگران و محققان قرار گرفته است، سمیت کم و پذیرش زیست محیطی این ترکیبات می باشند. با وجودی که بیشترین مقدار بیوسورفکتانت تولید شده به باکتری ها تعلق می گیرد، بعضی از مطالعات جدید حاکی از آن است که رودوتورولا موسیلیژینوزا و کاندیدا روگوزا نیز می توانند منابع جدیدی برای تولید بیوسورفکتانت باشند. هدف: بررسی خاصیت ضد قارچی بیوسورفکتانت بدست آمده از رودوتورولا در ترکیب با داروهای ضد قارچ (آمفوتریسین ب، فلوکونازول، کاسپوفانژین، ایتراکونازول، میکونازول، وریکونازول، پوساکونازول و تربینافین) علیه ایزوله های کاندیدای جدا شده از چند منبع مختلف. مواد و روشها: در مطالعه حاضر گونه رودوتورولا پالودیجنا برای تولید بیوسورفکتانت انتخاب شد و تولید محصول با استفاده از چندین تست مختلف مانند تست انتشار نفت خام، انهدام قطره و فعالیت همولیزین تایید شد. بیوسورفکتانت پس از کشت دادن مخمر در محیط سابورودکستروز براث و انکوباسیون به مدت 7-5 روز تولید گردید. سپس با عمل سانتریفیوژ مایع رویی از رسوب مخمرها جدا سازی و با کمک کلروفرم – متانول بیوسورفکتانت استخراج گریدید. بیو سورفکتانت خام به مدت یک شب در یخچال 4 سانتی گراد نگهداری شد. پس از آن باقیمانده کلروفرم متانول خارج شد و بیوسورفکتانت خشک در فریزر 20- تا موقع استفاده نگهداری شد. رقت ها ی سریالی از بیوسورفکتانت و داروهای آنتی فونگال در RPMI 1640 محتوی 01/0 رنگ رزاسورین تهیه شد. برای ارزیابی اثرات ترکیبی بیوسورفکتانت و آنتی فونگال از متد چیکربرد استفاده شد. غلظت ممانعت کننده کسری یا FIC برای هر مخمر محاسبه و سپس ΣFIC بدست آمد. در صورتی که FIC≤ 0.05∑ باشد اثر متقابل ترکیبات سینرژیستی، 5/0-1 افزایشی، 4-1 بدون اثر و در صورتی که FIC≥4∑ باشد دارای اثر آنتاگونیسم می باشد. نتایج: از بین 80 ایزوله ای که مشکوک به رودوتورولا بودند، فقط یک ایزوله برای تولید بیوسورفکتانت استفاده شد. طبق تست های تاییدی مختلف که انجام شد، این ایزوله دارای بیشترین قدرت تولید بیوسورفکتانت می باشد. ایز وله موردنظر مورد آنالیز مولکولی قرار گرفت و گونه رودوتورولا پالودیجنا تایید شد. نتایج ما نشان داد که بیوسورفکتانت خام تولیدی توسط رودوتورولا پالودیجنا دارای اثر ضد کاندیدایی در دامنه 8-5/0 میلی گرم بر میلی لیتر می باشد. در مطالعه حاضر اثر سینرژیسمی در ترکیب داروی کاسپوفانژین و بیوسورفکتانت مشاهده شد. استفاده همزمان تربینافین و بیوسورفکتانت نشان دهنده اثر افزایشی و ترکیب آمفوتریسین ب و بیوسورفکتانت بدون اثر می باشد. همچنین داروهای پوساکونازول، ایتراکونازول، میکونازول، فلوکونازول و وریکونازول در ترکیب با بیوسورفکتانت دارای اثر انتاگونیسم می باشند. نتیجه گیری: نتیجه گیری می شود که رودوتورولا پالودیجنا یک پتانسیل خوب برای تولید بیوسورفکتانت می باشد. علاوه بر آن بیوسورفکتانت تولیدی علیه ایزوله های مختلف کاندیدا آلبیکنس در invitro موثر می باشد. از سوی دیگر در ترکیب همزمان کاسپوفانژین و بیوسورفکتانت علیه کاندیدا آلبیکنس اثر سینرژیسم مشاهده شد.