بررسی تکثیر سلولهای بنیادی خونساز CD34+ بند ناف در همکشتی با سلولهای بنیادی مزانشیمی مغز استخوان در حضور شلاتور مس

مقدمه: پیوند سلولهای بنیادی طی چند دهه اخیر به موفقیتهای بالایی در درمان انواعی از اختلالات رسیده است. استفاده از خون بندناف به عنوان یکی از منابع سلولهای بنیادی دارای مزایایی نسبت به سایر منابع این سلولهاست.یکی از محدودیتهای مهم در استفاده گسترده از این منبع جهت پیوند در بزرگسالان, تعداد محدود HSCهای آن می باشد.یکی از راهكارهای پيشنهادي برای غلبه بر این مشکل افزایش تكثير بدون تمایز این سلولها در محيط هاي کشت مي باشد. سلولهای بنیادی مزانشیمی مغز استخوان به عنوان لایه فیدر قادرند از تکثیر بدون تمایز سلولهای بنیادی در محیط کشت حمایت کنند. مطالعات نشان داده اند که کاهش یون مس توسط TEPA در محیط کشت می تواند خودسازی سلولهای هماتوپوئتیک را افزایش دهد. مواد و روشها: سلولهای تک هسته ای مغز استخوان با استفاده از فایکول جدا شدند.با کشت این سلولها در محیط DMEM Low glucose با FBS 10% پس از 14 روز سلولهای چسبنده مزانشیمی جدا و تکثیر شدند.این سلولها با فلوسایتومتری و تمایز به استئوبلاست تایید شدند.سلولهای CD34⁺ خون بند ناف با استفاده از آنتی بادی های نشان دار با Microbead و ستون MACS جدا شدند.سپس این سلولها در چهار محیط کشت مختلف 1) محیط حاوی سایتوکاین 2) محیط دارای فیدر و سایتوکاین 3) محیط دارای TEPA و سایتوکاین 4) محیط دارای فیدر , سایتوکاین و TEPA کشت داده شدند.با شمارش سلولی , تعیین درصد سلولهای CD34⁺ به روش فلوسایتومتری و روش سنجش کلونی تاثیر سلولهای مزانشیمی و TEPA بر میزان تکثیر سلولهای CD34⁺ مورد بررسی قرار گرفت. نتایج: میانگین تعداد سلولهای CD34⁺ ,کل سلولهای هسته دار( TNCها) و کل سلولهای کلونی زا در روز دهم در محیط اول به ترتیب 6/5± 7/18, 7/8 ±48 و 7/12±5/45 برابر , در محیط دوم به ترتیب 4 /15± 5/58 , 22/11± 62 و6/18 ±6/78 برابر , در محیط سوم به ترتیب 7 /8± 45/44 ,8/8± 52 و 4/15± 94/58 برابر و در محیط چهارم به ترتیب 3 /15± 11/110, 78/21± 5/118 و 7/44 ±9/172 برابر بود. بحث: نتایج بررسی نشان می دهد که استفاده ازسلولهای مزانشیمی و TEPA به صورت همزمان بیشترین تاثیررا در تکثیر سلولهای بنیادی خونساز و حفظ پتانسیل کلونی زایی آنها درمقایسه با سایر شرایط داشته است .