کلونینگ ژن مولد آنزیم نیترات ردوکتاز جهت تولید نانو ذرات

امروزه نانو ذرات به کمک میکروارگانیسم ها نیز تولید می گردند که روشی سبز و سازگار با محیط زیست برای تولید نانو ذرات محسوب می شود. در این میان شناسایی ژن هایی که در تولید نانوذرات نقش ایفا می کنند، سبب برقراری ارتباط مستقیمی میان نانوتکنولوژی و بیوتکنولوژی می گردد. آنزیم نیترات ردوکتاز جز دسته اکسیدوردوکتازها می باشد و دارای سه دسته سیتوپلاسمیک، پری پلاسمیک و تنفسی است. این آنزیم پتانسیل استفاده در تولید نانوذرات از نمک های موجود در محیط کشت را دارد. نوع آنزیم مورد مطالعه در این تحقیق، نیترات ردوکتاز تنفسی است. این آنزیم در اپرون narGHIJ سازماندهی می گردد، و به صورت NarGHIJ در آنزیم بیان می شود. narJ نقش کلیدی در فعال شدن آنزیم دارد و حضور ان در عملکرد زیر واحدهای NarG وNarH ضروری است. از روش های بیان این پروتئین، ساخت سازه ژنی، حاوی narJ و وارد کردن این سازه به داخل باکتری می باشد، هدف ساخت این سازه است. بدین منظور، ژن narJ به طول 710bp از DNAی ژنومی باکتری اشرشیاکلی سویه DH5α، طی فرایند PCR جدا می شود. این ژن پس از برش توسط آنزیم های برشی، وارد پلاسمید pET21 گردید. این سازه پس از تهیه، با روش برش آنزیمی محدودالاثر مورد تایید قرار می گیرد. با توجه به نقش کلیدی NarJ این فرضیه مطرح می شود که افزایش بیان آن بتواند باعث بهبودی بیشتر در تولید نانو ذرات گردد.