کلونينگ و بيان ژن simA وcpsD استرپتوکوکوس اينيه در وکتور بيان pNZ8148

استرپتوکوکوزیس یکی از بیماری های باکتریایی در ماهی ها بویژه در قزل آلای رنگین کمانی است که مغز و سیستم عصبی ماهی را آلوده می کند و عامل آن باکتری استرپتوکوک اینیه S. iniae می باشد. S. iniae به عنوان پاتوژن مشترک انسان و دام و همچنین عامل بزرگ بیماری زائی در بسیاری از نواحی جهان به شمار می آید و برای اولین بار از آبسه پوست دلفین رودخانه آب شیرین آمازون (Inia geoffrensis) در سال 1970 جداسازی شده است. این باکتری از مهمترین پاتوژن ماهی ها بوده که سالیانه باعث بیش از 100 میلیون دلار تلفات در پرورش ماهی می شود و بیش از 30 گونه ماهی آب های شیرین و شور استعداد ابتلا به این بیماری را نشان داده اند که بسیاری از آنها از لحاظ اقتصادی مهم هستند، از جمله قزل آلا رنگین کمانی. علائم بالینی شایع عفونت S. iniae در ماهی ها عبارتند از، از دست دادن جهت گیری، بیحالی، زخم، بیرون زدگی چشم و شنای نامنظم. ژن simA، M-like پروتئینی با bp 1566 از S. iniae گونه K288 است که 521 اسیدآمینه را کد می کند، که آن نیز پروئینی با kDa 5/57 را کد می نماید و دارای عملکرد زیر است : S. iniae را در برابر پپتیدهای کاتیونی ضدمیکروبی ( AMPs ) محافظت نمی نماید. منجر به چسبندگی S. iniae و تهاجم به سلول های اپی تلیال ماهی ها می شوند. منجر به مقاومت S. iniae در برابر ماکروفاژ میزبان می شود. کپسول پلی ساکاریدی نقش حیاتی در حفاظت میکروب های بیماری زا در برابر دفاع ذاتی میزبان در طول عفونت بازی می کند و منجر به محافظت در برابر بیگانه خوارها می شود. اُپرن های کپسول استرپتوکوک یک منطقه تقریبا kb21 با 700 نوکلئوتید و حاوی گروهی از ژن های حفاظت شده چندگانه (cpsA-E) می باشد که جمعاً مسئول پلیمریزاسیون و تعیین طول زنجیره کپسول و قرار گرفتن آن در سطح باکتری هستند . در این مطالعه ژن simA و cpsD بر اساس توالی ثبت شده در بانک ژن سنتز شد و سپس درون وکتور بیانی pNZ8148 کلون شد. وکتور جدید ساخته شده به باکتری بیانی E. coli سویه BL21 ترنسفرم گردید. در ادامه جهت تأیید پروتئین بیان شده از روش وسترن بلات استفاده گردید.