كلون كردن ژن مرتبط با آنتي ژن P35 انگل توكسوپلاسما گوندي

هدف: با توجه به فقدان يك روش استاندارد براي تهيه و خالص سازي آنتي ژنهاي انگل توكسوپلاسما گوندي از سويي، و عدم امكان تشخيص زمان ايجاد عفونت از سوي ديگر، استفاده از آنتي ژنهاي خالص نو تركيب كه مربوط به مراحل آغازين تكثير انگل بوده و با استفاده از دانش بيولوژي مولكولي تهيه شده باشند مورد توجه بسيار قرار گرفته است. هدف از انجام اين كار، در اختيار داشتن ژن كلون شده در پلاسميد است تا با استفاده از بيان ژن بتوان به آنتي ژن نوتركيب انگل دست يافت. روشها:‌ قسمتي از ژن P35 كه توالي سيگنال آنتي ژن را شامل مي شود با استفاده ازواكنش زنجيره پليمراز (PCR) تكثير شد و پس از خالص سازي و انجام Ligation درون و كتور pGEM-5z كلون شده و به وسيله ترانسفورماسيون به باكتري منتقل گرديد. كلون شدن ژن با استفاده از Restriction Enzyme Analysis وColony-PCR تاييد شد. پلاسمي نو تركيب حاصله براي حصول اطمينان از صحت توالي ژن كلون شده به وسيله تعيين توالي مورد ارزيابي قرار گرفت. نتايج: نتيجه الكتروفورز محصول PCR تكثير شدن قطعه اي 450جفت بازي را نشان داد. انجام Colony- PCR در مورد كلني هايي كه به روش ά- Completation غربالگري شده بودند نشان دهنده وجود قطعه DNA مورد نظر درMultiple Cloning Site وكتور مورد استفاده بود و انجام Restriction Enzyme Analysis برروي پلاسميدهاي استخراج شده اين امر را تاييد كرد. ارزيابي توالي تعيين شده به وسيله نرم افزارBLAST نشان داد سكانس ژن مذكور با داده هاي موجود در بانك ژن همپوشاني قابل توجهي دارد. نتيجه گيري: كلون شدن ژن مرتبط با آنتي ژن P35 توكسوپلاسما در وكتور GEM دو امكان مهم را در اختيار ما قرار مي دهد. يكي اينكه با وارد ساختن ژن كلون شده به درون باكتري، نگهداري ژن را به مدت طولاني براي كاربردهاي مكرر ميسر مي سازد و به همراه تكثير پلاسميد، ژن درون پلاسميد نيز تكثير مي يابد. دوم اينكه قرار داشتن محل اثر آنزيم هاي برشگر خاص در دو سر قطعه ژن، اين امكان را فراهم مي آورد كه با اثر دادن آنزيم هاي مذكور، به راحتي بتوان ژن مورد نظر را از وكتور خارج ساخته و جهت بيان ژن و تهيه پروتئين نوتركيب، اين ژن را در يك وكتور بيان، ساب كلون نمود. همچنين مشاهده تطابق توالي به دست آمده با اطلاعات موجود، تاييدي برنتايج مطالعات است كه با استفاده از بررسي مقايسه اي توالي ژنهاي توكسوپلاسما و روشذ (Restriction Fragment Length Polymorphism) RFLP صورت گرفته و نشان مي دهد كه بين سه دودمان ژنتيكي موجود براي توكسوپلاسما، فارغ از محل جغرافيايي جدا شدن انگل، از نظر توالي DNA حداكثر تا 1% اختلاف ممكن است وجود داشته باشد.

توكسوپلاسموزيس، آنتي ژن نوتركيب، كلونينگ