هدف: تهيه و تخليص آنتي (A60) 60 از سيتوپلاسم BCG مواد و روشها: در اين تحقيق از روش کروماتوگرافي حذفي توسط ستون سفارز 4B براي تخليص A60 از سيتوپلاسم BCG استفاده گرديد. براي تاييد تخليص آنتي ژن، تکنيک ايمونوالکتروفوز با استفاده از آنتي باديهاي Anti BCG و Anti A60 به کار گرفته شد. آنتي ژن 60 تخليص شده با روشهاي الکتروفوز در ژل آگارز 0.5 درصد و دبل ديفوژن نيز مورد بررسي قرار گرفت. براي بررسي وجود آنتي ژن از هر دو قسمت سيتوپلاسم و ديواره سلولي باکتري آزمايش دات بلات با استفاده از آنتي بادي Anti A60 انجام شد. براي مطالعه ساختاري اين آنتي ژن اجزاي آنتي ژن در SDS-PAGE تفکيک شدند و به کاغذ نيتروسلولز منتقل شده و آزمايش وسترن بلات با استفاده آنتي بادي Anti A60 انجام شد. يافته ها: آنتي ژن تخليص شده در ايمونوالکتروفوز متقاطع با استفاده از Anti BCG و Anti A60 به صورت کم حرکت ترين جز سيتوپلاسم نمودار گرديد. آنتي ژن مذکور در الکتروفوز با ژل آگارز به صورت تک باند مشاهده گرديد و در ايمونوديفيوژن در مواجه با Anti BCG دو خط رسوبي تشکيل داد. در بررسي با روش دات بلاتينگ هم سيتوپلاسم و هم ديواره سلولي باکتري با آنتي بادي Anti A60 واکنش مثبت نشان دادند. وقتي اجزايA60 با روش SDS-PAGE تفکيک شدند و وسترن بلاتينگ با استفاده از آنتي بادي Anti A60 انجام شد، اجزاي پروتئيني با اوزان، 35، 38، 40، 46 و 65 کيلو دالتون شناسايي گرديد. نتيجه گيري: نتايج به دست آمده مبين اين است که A60 يک ماکرومولکول با وزن مولکولي 10000-1000 کيلو دالتون در مايکوباکتريوم بويس سويه BCG و داراي اجزاي متعدد پروتئيني است. A60 هم در سيتوپلاسم و هم در ديواره سلولي BCG موجود است و مي توان آن را با استفاده از کروماتوگرافي حذفي، از سيتوپلاسم واکسن BCG که خوشبختانه در کشور ما نيز توليد مي گردد، به راحتي تخليص نمود.
کلید واژگان :آنتي ژن A60)60)، گروماتوگرافي، BCG، خالص سازي، مايكوباكتريوم بوويس
ارزش ریالی : 350000 ریال
با پرداخت الکترونیک