سابقه و هدف : نماینده انتی ژنهای بزرگ سطحی تاکی زوئیتها ی توکسوپلاسما گونده ای SAG3, SAG2, SAG1 می باشند. ایمونیزاسیون با SAG1 ایمنی محافظت کننده در موشها ایجاد میکند. SAG3 خیلی شبیه به SAG1 در ساختمان ووظایف و کارکرد می باشدو می توان ان را بعنوان کاندیدایی جهت تهیه واکسن و تشخیص بیماری مورد استفاده قرار داد. هدف این مطالعه کلون نمودن انتی ژن اختصاصی SAG3 (P43) توکسوپلاسما در وکتور بیانی یوکاریوتی pcDNA3 جهت تهیه پلاسمید نوترکیب حاوی این ژن است تا بتوان از ان به عنوان DNA واکسن استفاده کرد روش کار: ژن SAG3 پس از تکثیر به روش PCR در پلاسمید pBluescript کلون شد. سپس در باکتری اشرشیا کلی سوش TOP10 ترانسفورم شد. پلاسمید نوترکیب پس از تکثیر از باکتری استخراج شد و ژن هدف با استفاده از برش انزیمی با انزیم های BamHI, HindII از پلاسمید جدا گردید. از طرف دیگر پلاسمید pcDNA3 برای ساب کلونینگ قطعه SAG3 با انزیم های فوق برش داده شد. SAG3 درون پلاسمید pcDNA3 ساب کلون شدو این محصول واکنش در باکتری فوق ترانسفرم شد ودر محیط کشت LB اگار حاوی امپی یلین کشت داده شد.پلاسمید های نوترکیب pcSAG3 بوسیله کیت استخراج پلاسمید از باکتری استخراج شد. یافته ها پلاسمید های استخراج شده جهت تایید کا با روشها PCR و برش انزیمی و با کمک انزیمهای فوق با الکترو فورز تایید و نتایج نشان داد که قطعه SAG3 در پلاسمید pcDNA3 کلون شده استو باند حدود 1158 جفت نوکلئوتید روی ژل اگارز ایجاد شده بودکه هم اندازه ژن SAG3 توکسوپلاسما گوندی است و تایید نهایی با استفاده از توالی یابی انجام شد نتیجه گیری: نتایج نشان داد که کلونینگ و ترانسفرم قظعه SAG3 در پلاسمید pcDNA3 با موفقیت انجام شده است. لذا می توان از ان بعنوان ابزار بالقوه ای در تشخیص و پیشگیری از ابتلا به عفونت توکسو پلاسما گونده ای به تنهایی و یا همراه دیگر انی انتی ژن های انگل در انسان مورد استفاده قرار داد. کلید واژه ک توکسوپلاسما گونده ای، ژن SAG3 ، کلونینگ، pcDNA3
کلید واژگان :توکسوپلاسما گونده ای، ژن SAG3 ، کلونینگ، pcDNA3
ارزش ریالی : 600000 ریال
با پرداخت الکترونیک