اهداف: آنزيم I CEL يک گليکوپروتئين گياهی است که از گياهان دسته کرفس استخراج می شود و اولين آنزيم يوکاريوتی است که پيوند ناجور را با يک اختصاصيت بالا در يکی از دو رشته DNA برش می دهد. هدف از اين پژوهش کلون کردن ژن، بيان و تخليص آنزيم CEL I اندونوکلئاز و بررسی عملکرد آن بر روی ژنهای جهش يافته در محيط آزمايشگاهی بوده است. مواد و روش ها: در اين تحقيق از گياه کرفس mRNA استخراج شد و سپس RT-PCR صورت گرفت و محصول به عنوان الگودر تکثير PCR مورد استفاده قرار گرفت. ژن در پلاسميد بيانی pET32a ساب کلون شد و درون باکتری E.coli سويه BL2I( DE3) plysS ترانسفورم گرديد. پروموتور ژن با IPTG القا شد و با وسترن بلاتينگ مورد بررسی قرار گرفت. پروتئين با ستون کروماتوگرافی تمايلی ( S.Tag / His.Tag ) تخليص شد. همچنين فعاليت اندونوکلئازی آنزيم روی محصول PCR ژن جهش يافته و نرمال در حال بررسی می باشد. يافته ها: کلونينگ ژن با موفقيت انجام شد، پروتئين نوترکيب تخليص شد و نتايج اوليه نشان دادند که آنزيم می تواند نواحی هترودوبلکس ژن را شناسايی کند. نتيجه گيری: آنزيم CEL I نوترکيب می تواند نواحی هترودوبلکس راشناسايی نمايد.
کلید واژگان :آنزیم CELI اندونوکلئاز، وسترن بلاتینگ، پلاسمید pET32a، پروتئین نوترکیب، کروماتوگرافی تمایلی
ارزش ریالی : 350000 ریال
با پرداخت الکترونیک